乙类：流行性脑脊髓膜炎诊断标准及处理原则 GB 16884-1997_

乙类：流行性脑脊髓膜炎诊断标准及处理原则 GB 16884-1997

作者：佚名　|　来源：不详　|　发布日期：07-11-01 15:39:17　| 点击次数：[]　|　文字调整[大][中][小]

可将A群Nm多糖菌苗稀释到10μg/mL进行包被。
　　B2.3.2　抗原的包被
　　用蒸馏水把酶标板各孔冲洗干净，空干水，置37℃烘干；往每孔中加包被抗原100μL，置4C过夜；倾出孔内液体，用洗涤液冲洗各孔3次，每次1min，并且均在干净的吸水纸上或纱布上拍打酶标板，空干孔内的液体。
　　B2.3.3　填充
　　空干孔中液体，用1mL吸管加填充液，每孔加以0.25mL；置室温30min，同上洗涤，空干孔内液体；酶标板置塑料袋中，密封贮存于4C，可备用一个月。
　　B2.3.4　检测待检血清
　　B2.3.4.1　病人急性期和恢复期血清均从此1∶2开始，用稀释液连续倍比稀释到第7孔，第8孔以稀释液代替血清作为阴性对照之一；酶标板置37℃培育1h后同上洗涤。
　　B2.3.4.2　加酶结合物
　　上述酶结合物用稀释液稀释到预试测定的最适工作浓度，每孔加100μL，置37C反应1h后同上洗涤酶标板。
　　B2.3.4.3　每孔加B2.2.10中配制的底物溶液100μL，置37℃反应15min。
　　B2.3.4.4　终止反应
　　每孔加2mol/L硫酸(H2SO4)50μL。
　　B2.3.4.5　测光密度值
　　在495nm波长下测定每孔的光密度值，并记录。
　　B2.3.4.6　每次实验设置下列对照：
　　阳性和阴性血清质控对照；抗原对照(以稀释液代替待检血清，其余同试验组)；缓冲液对照(以包被液和稀释液代替抗原和待检血清，其余同试验组)。
　　B2.3.4.7　结果判定
　　若被检孔的光密度值与平行对照孔的光密度值比值(P/N)≥2，即判断为阳性反应。
　　B3　杀菌力试验
　　B3.1　目的
　　应用微量杀菌力试验(TTC法)测定病人急性期和恢复期血清中对Nm的杀菌抗体水平。此方法也可用于健康人群的血清抗体测定。
　　B3.2　材料
　　B3.2.1　靶菌：对补体的自然杀菌作用具有耐受性，但对杀菌抗体反应敏感的Nm(A群29019，B群和C群Nm)。
　　B3.2.2　稀释液：Dulbeccos磷酸盐缓冲盐水
　　A液：氯化钠(NaCl)8.0g，氯化钾(KCl)0.2g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.15g，磷酸二氢钾(KH2PO4)0.2g，蒸馏水800mL；
　　B液：氯化钙(CaCl2)0.1g，蒸馏水100mL；
　　C液：氯化镁(MgCl2·6H2O)0.1g，蒸馏水100mL。
　　上述三液分别灭菌121℃，15min，置4℃备用。需用时按A液8份，B液和C液各1份的比例混合，pH为7.1。
　　使用时每100mL稀释液加灭活小兔血清1mL，万古霉素500μg，多粘菌素B2500单位或硫酸抗敌霉素5000单位。配就的稀释液盛于小瓶中，置4℃备用2周。
　　B3.2.3　滴定板：底部呈"U"形的96孔有机玻璃微滴板，并备用同样大小的普通玻璃作盖板。将它们平放在80℃的烤箱内烤2h后备用。试验完毕，以约80℃的热水泡板1h杀死靶菌，再以自来水冲洗干净，并用棉棒拭净不洁净的孔。最后以蒸馏水冲洗一次，37℃烤干后同上于80℃干烤。
　　滴定板使用一段时间后或遇到杂菌污染较严重时，可用热水杀死靶菌并冲洗干净；在比较稀的硫酸重铬酸钾清洁液内浸泡4h，冲洗干净后同上处理备用。
　　B3.2.4　兔补体
　　B3.2.4.1　补体可从幼龄兔或成龄兔血清中筛选，预试测定要求它们既不能具有自然杀靶菌的活性，但加有已知阳性参考血清时应产生较高杀菌抗体滴度。不过，幼龄兔被选中的机率较高。
　　B3.2.4.2　将所选家兔从颈动脉放血或抽取全部心血，置4℃，待血液凝固后尽早分离血清，混合后，分装到2mL安瓿中，每只放1mL血清。立即将安瓿置-20℃以下冰箱内冷冻过夜，次日进行冷冻干燥。冻干以后再抽样检查时，不应出现非特异杀菌反应，特异杀菌抗体滴度在1：3200以上则保存在-20℃以下冰箱内，可备用3～6个月。为减少补体批次间的差异，可将所选定的兔血清混合后进行冷冻干燥，再作质量检定，合格者则保存于-20℃以下。
　　B3.2.5　氯化三苯四氮唑(

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