min时凝集更明显，此时可记录试验结果。
C3.2.7 若只在试验组的红圈内出现明显凝集，但Lx本身与BBSB液以及在平行对照组的红圈内皆不出现凝集则判断为阳性反应。此时与阴性对照组比较，Lx悬液变得较清亮，Lx明显地聚集成较大的颗粒。
C3.2.8 在上述病人标本中只要有一种标本与抗任何一群Nm的IgG所致敏的Lx发生明显凝集反应，则说明所检标本中含有Nm相应群特异的抗原，即可辅助临床诊断为流脑。
附录D
(提示的附录)
以PCR检测病人急性期血清或CSF中Nm的DNA特异片段
D1 目的
应用PCR检查病人急性期血清或CSF中Nm的DNA特异片段，对流脑病人进行早期诊断。
D2 材料
D2.1 疑似流脑患者的CSF或急性期血清。
D2.2 Nm的模板DNA和正常人血清作为对照。
D2.3 4×dNTP。
D2.4 琼脂糖。
D2.5 溴化乙啶。
D2.6 Taq酶(Promega)。
D2.7 引物1为：5＇-ATTATTCAGACCGCCGGCAG-3′；
引物2为：5＇-CCGATAATCAGGCATCCG-3′。
D2.8 液体石蜡。
D2.9 无菌去离子水。
D2.10 紫外光检测器。
D2.11 PCR扩增仪。
D2.12 10×PCR反应缓冲液［500mmol/L KCl，100mmol/L Tris－HCl，(室温，pH8.3)，15mmol/LMgCl2，0.1％(W/V)］明胶。
D2.13 载样缓冲液(0.2％溴酚蓝，50％蔗糖)。
D2.14 1×TBE电泳缓冲液：
0.089m ol/L Tris－H3BO3
0.002mol/L EDTA
D2.15 电泳仪。
D2.16 分子量标准：λDNA－EcoR I/HindⅢ。
D3 扩增程序
在0.5mL Eppendorf管中分别加入：
反应物 加样顺序 体积(μL) 终浓度
10×缓冲液 1 5.0 1×缓冲液
4×dNTP混合物 2 4.0 200μmol/L 每种
dNTP
引物1 3 2.5 1μmol/L
引物2 4 2.5 1μmol/L
模板DNA或待检标本 5 5.0 5.0ng DNA/μL
(标本需95℃加热5min预处理)
无菌去离子水 6 30.5
(95℃水浴10min，快速离心30s)
TaqDNA聚合酶 7 0.5 1u
液体石蜡 8 25.0
D3.1 混匀离心，于72℃反应2min后即开始循环。循环参数如下：
94℃变性反应30s；
56℃退火反应30s；
72℃延伸反应60s。
D3.2 30个循环后再72℃延伸4min。
D3.3 反应结束，取出反应管冷至室温后置4℃供检测。
D4 扩增产物的检测
D4.1 取2μL反应产物与1μL载样缓冲液混合。
D4.2 用含溴化乙啶(0.5μg/mL)的1.2％琼脂糖凝胶检测扩增产物。
D4.3 75mm×48mm微型胶，以6V/cm电泳1h，电泳缓冲液为1×TBE。
D4.4 电泳结束后，将凝胶置紫外光检测器上观察结果、照相。
D4.5 扩增产物特异片段的长度为596个碱基对。
附录E
(提示的附录)
流行性脑脊髓膜炎治疗原则
E1 普通型
E1.1 一般治疗 卧床休息，流质饮食，必要时鼻饲或静脉补液。
E1.2 对症治疗 高热、头痛、呕吐、烦躁或惊厥等，应分别给予相应处理。
E1.3 病原治疗 轻症病例首选SD，疑对磺胺过敏或耐药者应改换其他药物如青霉素或氯霉素。
E1.3.1 磺胺嘧啶(SD)：成人6～8g/d，小儿0.15～0.2g/(kg·d)，每日总量不超过6g，加等量碳酸氢钠分3～4次服用，首剂加倍。频繁呕吐或不能口服者，应改为注射，SD为首选。成人4～6g/d，小儿0.1～0.15g/(kg